ПЦР-диагностика (кал) — сдать анализы в Москве. Научный центр “ЭФиС”

Хеликобактер пилори (H. pylori) — спиралевидная или палочковидная бактерия, она поселяется на слизистых оболочках желудка и двенадцатиперстной кишки человека, приводит к повреждению слизистых и вызывает воспалительные заболевания.

Заражение происходит от больного человека или носителя инфекции. Хеликобактер пилори передается фекально-оральным или орально-оральным путем при нарушении правил гигиены, через воду, пищу, загрязненные предметы, часты семейные случаи инфицирования. Хеликобактер пилори имеет большую распространенность во всем мире.

Хеликобактер пилори может приводить к развитию гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциируется с повышенным риском развития рака желудка.

Как можно установить инфицирование Хеликобактер пилори

Методы лабораторной диагностики делятся на прямые и косвенные.

Прямые – методы определения самого возбудителя или его частиц. Хеликобактер пилори может быть обнаружен на слизистых оболочках желудка или двенадцатиперстной кишки:

  • методом микроскопии (при проведении гистологического или цитологического исследования),
  • методом культурального исследования (бактериального посева),
  • методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяются участки генетического материала — ДНК бактерии в пробе (при исследовании биоптата слизистых жедудка и двенадцатиперстной кишки, в пробах кала).

Косвенные — методы исследования антител (иммуноглобулинов). Антитела к антигенам (белкам) микроорганизма вырабатываются в ответ на проникновение возбудителя в организм и отражают реакцию организма на инфекцию. Наиболее распространенным методом определения антител является иммуноферментный анализ (ИФА).

Результат анализа 

Полученный результат анализа обязательно должен интерпретировать лечащий врач с учетом всех данных о состоянии здоровья пациента, комплекса проведенных  инструментальных и лабораторных исследований.

На сегодняшний день существует несколько методик, чтобы выявить хеликобактер пилори: анализ на антитела к хеликобактер пилори, анализ кала способом пцр, уреазный дхательный тест, биопсия, цитология. Самыми эффективными являются ифа (иммуноферментный анализ) на хеликобактер и анализ кала (пцр).

Диагностика хеликобактер пилори проводится двумя методами:

  • инвазивный (эндоскопия с биопсией)
  • неинвазивный (лабораторные методы).

Надежным методом определения хеликобактер является инвазивный. Анализ на бактерию проводят всем, кто жалуется на боли и дискомфорт в желудке.

Выявление pylori igg антител является обычным делом для исследования эпидемиологии инфекции.

Ифа

Иммуноферментный анализ на антитела IgG позволяет узнать концентрацию антител в крови относительно хеликобактер в организме человека. Количество антител определяется с помощью различных химических реакций. IgG – показатель, который подтверждает присутствие в организме бактерии. Высокий уровень igg к helicobacter pylori может сохраняться до и после устранения микроорганизма.

Дыхательный тест – определение и его виды

 Дыхательный тест на выявление хеликобактер пилори – это диагностика инфекции, которая позволяет выявить активность хеликобатер пилори, оценить уровень заражения. Гастроэнтерологи, терапевты, педиатры часто применяют его в своей практике. Дыхательный тест на хеликобактер пилори применяется для первичной диагностики бактерии. Еще используют для контроля лечебного процесса заболевания и проверки действенности терапевтического лечения.

Метод является абсолютно безопасным, самым эффективным и востребованным в медицине на сегодняшний день. Анализ показывает продукты жизнедеятельности бактерии в воздухе, который вдыхает пациент.

Есть два основных вида метода. Они отличаются по реагирующему компоненту:

  • углеродный
  • аммонийный.

Более точный результат дает углеродный дыхательный анализ.

Преимущества и недостатки метода

Этот респираторный метод имеет свои преимущества:

  1. Результат готов за короткий промежуток времени (20-25 минут).
  2. Достоверность результата 90-95%.
  3. Тест не наносит вреда организму человека.

Так как у метода одни достоинства он не имеет противопоказаний. Но результат будет точным только в том случае, если к тесту правильно подготовиться.

Подготовка к дыхательному тесту

Чтобы тест дал самые точные результаты, рекомендуется специальная подготовка к дыхательному тесту:

  • за месяц до прохождения теста нельзя принимать антибиотики;
  • за три дня до обследования не употреблять бобовые и спиртные напитки;
  • за 6 часов до сдачи анализа ничего не есть;
  • за 14 дней до обследования исключить прием препаратов, которые подавляют течение; физиологических и ферментативных процессов в организме;
  • за несколько часов нельзя жевать жвачку, курить;
  • последний прием пищи не позднее 22 часов, это должен быть легкий ужин;
  • за час до обследования можно выпить не более 10 мл воды;
  • чтобы результат анализа был точным, пациент не должен двигаться;
  • перед обследованием хорошо почистить зубы и ротовую полость.

Очень важно подготовиться к тесту правильно, иначе точного результата не будет. Если пациент не смог выполнить все правила, он должен сообщить об этом врачу и ему будет назначено другое время.

Как проводится тест

Процедуру проводят в условиях стационара под наблюдением специалиста. Если обследование проводят с помощью трубки, манипуляция длится не более 15 минут. Если используется электронный прибор, время процедуры составляет 10 минут.

Проводится процедура просто:

  • пациент принимает удобное положение
  • в рот кладется пластиковая трубка, а дыхание должно быть в обычном режиме
  • желательно не касаться трубки языком и небом, чтобы туда не попала слюна
  • если скапливается слюна, ее разрешается сплюнуть или сглотнуть, вытащив трубку, берется проба воздуха
  • первый этап манипуляции продолжается 6 минут
  • пациенту дают выпить раствор карбамида
  • трубку помещают опять в рот
  • второй этап также длится 6 минут, проводится исследование воздуха
  • после этого выдается результат.

Расшифровка результатов анализа и показатели нормы

Нормой является, когда разница между показателями первого и второго этапа обследования равна нулю. Если в организме имеется хеликобактер, показатель будет выше нуля.

При показателе:

  • следовое значение — 1, 5 -3,5, микроорганизма находится в неактивной фазе и от него можно быстро избавиться;
  • 3,5 — 5.5 – низкий уровень;
  • малый — до 7 промилле;
  • от 7 до 15, бактерия в активной фазе, размножается, процесс лечения затрудняется;
  • выше 15 – высокий уровень обсеменения.

При любом положительном результате, терапию нужно начинать сразу, это позволит избежать осложнений и болевых ощущений. Но схема лечения хеликобактер должна быть составлена врачом.

Противопоказания к проведению

Метод не имеет противопоказаний, так как не включает в себя никаких вмешательств и нагрузок. Его можно применять для всех, без ограничений.

Анализы крови

При жалобах пациента на боли в желудке, любой дискомфорт, при функциональных расстройствах пищеварения, при гастритах и язвенной болезни сдается анализ крови на хеликобактер пилори. Антитела к helicobacter pylori в крови являются показателем заражения человека бактерией хеликобактериоза.

Сдавать кровь на бактерию хеликобактер рекомендуется при:

  • слабом иммунитете
  • наследственная предрасположенность к онкологическим заболеваниям желудка
  • в качестве профилактической диагностики
  • с целью оценки полученного лечения от инфекции.

Как подготовиться к анализу?

Перед анализом необходимо за 8 часов до проведения теста не принимать пищу, кофе, чай, спиртные напитки, не курить. Этот анализ на хеликобактер пилори определяет количество иммуноглобулинов. Когда в организм человека попадает определенный токсин, вирус, микроб, иммуноглобулины взаимодействуют с ними и нейтрализуют эти вредные вещества. Анализ показывает взаимодействие возбудителя болезни и иммуноглобулинов, что дает возможность установить, есть ли хеликобактер пилори в желудке или двенадцатиперстной кишке.

Преимущества и недостатки

Преимущества данного теста:

  • диагностическая процедура не дорогая;
  • высокая точность результата;
  • анализ доступен для всех.

Тест на хеликобактери пилори имеет свои недостатки:

  • имеются факторы, которые влияют на результат анализа;
  • некоторые пациенты испытывают страх при заборе крови;
  • тщательный результат получают через 4-6 дней.

Расшифровка анализа

Расшифровка результата анализа крови на хеликобактер пилори можно сделать и без медицинских навыков. Антитела разделяют на категории A, G, M. Напротив каждой категории на бланке имеется результат. Если все показатели анализов крови на хеликобактер пилори не превышают норму, значит бактерии в организме нет:

  • иммуноглабулин LgG отсутствует или значительно ниже нормы: бактерии отсутствуют в организме;
  • LgG обнаружен: хеликобактриоз есть или был перенесен раньше;
  • иммуноглабулин LgM не обнаружен или ниже нормы: условная норма хеликобактер пилори;
  • LgM класса обнаружен: начальная стадия заболевания;
  • иммуноглабулин LgA не обнаружен в крови: это может свидетельствовать о ранней стадии болезни, недавно проведенной терапии антибиотиками или больной на этапе выздоровления.

Противопоказания

Анализ крови на хеликобактер не проводят:

  • при судорогах
  • при повышенной возбудимости больного
  • если в месте инъекции имеется поражение кожи.

Анализ крови на антитела при флебите вен также не назначают.

Анализ кала

ПЦР – что это такое? Это чувствительный способ определения инфекции. Он распознает ДНК или РНК возбудителя. Для ПЦР материалом для исследования является кал.

Анализ кала на антиген хеликобактер является самым удобным исследованием для пожилых людей, детей и тяжелобольных. В этом случае не требуется присутствия пациента в лаборатории и процедура не связана с травмированием организма. Кстати, о хеликобактер пилори у детей мы расскажем отдельно.

Но обнаружить бактерию в кале не просто. В кишечнике микроорганизм повергается воздействию неблагоприятных условий для него (желчные кислоты, недостаток кислорода). Поэтому активные организмы приспосабливаются к новым условиям, меняют свою форму и их число резко снижается.

Применяется специальный метод полимеразной цепной реакции (пцр), который позволяет определить фрагмент ДНК микроорганизма. Точность результата – 95-96%.

Что нельзя перед сдачей кала

Важно знать, как правильно сдать анализ на хеликобактер. Перед сдачей кала, за 3-4 дня не рекомендуется принимать много пищевых волокон, красящих продуктов, неорганических солей, лекарств, которые усиливают перистальтику кишечника.

Не годится для исследования на хеликобактер кал после клизмы или слабительного.

Анализ кала на хеликобактер пилори проводят до начала лечения. Если до этого пациент принимал антибактериальную терапию по поводу лечения какого-либо заболевания, лучше назначить другой метод обследования.

Расшифровка анализа

Результат анализа на helicobacter pylori бывает положительный и отрицательный. Положительный результат свидетельствует о наличии или перенесенной инфекции. Отрицательные данные — об отсутствии болезни или неправильном проведении исследования.

Цитологический анализ

Цитология есть один из самых точных методов обнаружения хеликобактер пилори в слизистый желудок. При этом методе анализ на хеликобактер пилори практически не дает ложных положительных результатов.

Для исследования берется при фиброгастродуаденоскопии (фгдс) биопсийный материал, мазок – отпечаток слизистой. Результат бывает положительный или отрицательный. По степени обсеменения:

  • слабая – при увеличении в 360 раз в поле зрения обнаруживается до 20 бактерий;
  • умеренная – 20-40;
  • высокая – более 40 бактерий.

Гастроскопия

При помощи фгс (желудочного зонда) при фгдс зрительно проникают в ЖКТ, выбирают самые подозрительные участки для забора слизи из желудка. Затем ее помещают на специальную среду, где определяют уреазную активность микроорганизма. Если индикатор из желтого цвета окрасится в малиновый, это означает, что в материале есть бактерии.

Для выявления Хеликобактер пилори используется дыхательный уреазный тест, не требующий много времени, безвредный и не вызывающий никаких неприятных ощущений и представляющий собой золотой стандарт диагностики инфекции. Симптомы и лечение Хеликобактер пилори индивидуальны. Факт присутствия возбудителя в организме далеко не всегда сопровождается патологическими процессами и требует приема лекарственных препаратов.

Для выяснения и согласования лучших подходов к выявлению и лечению хеликобактерной инфекции в Европе была сформирована группа из ведущих специалистов гастроэнтерологов. Периодически на основании проводимых конференций и совещаний они публикуют протоколы – Маастрихтские консенсусы, по названию города, где проходили первые встречи.

Всего их на данный момент существует пять:

  • Маастрихт 1 (1996 г., Маастрихт);
  • Маастрихт 2 (2000 г., Маастрихт);
  • Маастрихт 3 (2005 г., Флоренция);
  • Маастрихт 4 (2012 г., Флоренция);
  • Маастрихт 5 (2016 г., Флоренция).

По результатам консенсуса «Маастрихт 2» было установлено, что, к сожалению, ни одна из проводимых схем эрадикации, несмотря на одновременное применение нескольких препаратов, не гарантирует полное уничтожение инфекции. В связи с этим было рекомендовано лечить пациентов сначала по схеме «первой линии», а затем при отсутствии терапевтического эффекта – по схеме «второй линии».

Необходимость проведения повторных курсов антихеликобактерной терапии объясняется повышением резистентности H. pylori к назначаемым антибиотикам, что является главной проблемой современной гастроэнтерологии при лечении ассоциированных с возбудителем заболеваний.

Проникновение возбудителя в слизистую оболочку желудка

Применяемые сегодня, чтобы вылечить хеликобактерную инфекцию, эрадикационные схемы были утверждены на «Маастрихт 4».

Основными требованиями для них являются:

  • обеспечение минимум 80% случаев излечения от инфекции, заживления гастрита или язвы, подтвержденного повторным исследованием;
  • длительность терапии не более 14 суток;
  • приемлемая низкая токсичность используемых препаратов;
  • безопасность, наличие побочных эффектов менее чем у 15% пациентов;
  • отсутствие серьезных побочных эффектов, требующих досрочной отмены таблеток;
  • доступность и удобство для пациентов, небольшое количество приемов лекарства от Хеликобактер пилори в сутки;
  • преодоление постоянно растущей устойчивости бактерии к применяемым антибиотикам;
  • возможности замены препаратов внутри схемы при выявлении аллергических реакций или других проблем.

Интересно: Исторически первой успешно апробированной схемой эрадикации Хеликобактер пилори было применение субсалицилата висмута и Метронидазола. Испытал ее на себе ученый Барри Маршалл, обнаруживший совместно с коллегой Helicobacter pylori в слизистой желудка. В 1984 гг. он преднамеренно выпил содержимое чашки Петри с культурой бактерий, а затем вскоре после появления характерных симптомов спровоцированного гастрита провел указанное лечение. После 14 дней терапии по результатам биопсии возбудителя в желудке обнаружено не было.

Препараты I линии

Задачей эрадикационной терапии первой линии является уничтожение H. pylori у максимально возможного числа пациентов.

Согласно рекомендациям Маастрихт 3, назначают так называемую трехкомпонентную схему (тройная терапия), которая включает следующие препараты и дозировки в день:

  • ингибитор протонной помпы (ИПП) дважды в стандартных дозах;
  • антибиотик Кларитромицин по 0.5 г два раза;
  • антибиотик Амоксициллин по 1 г или антибактериальное средство Метронидазол по 400 или 500 мг дважды.

Как ИПП, снижающие секрецию желудочного сока и выделение соляной кислоты, больных лечат следующими препаратами в указанных дозировках на один прием:

  • Лансопразол – 30 мг;
  • Пантопразол – 40 мг;
  • Эзомепразол, Омепразол или Рабепразол – 20 мг.

Минимальная продолжительность курса лечения составляет 7 дней. По ряду проведенных клинических исследований оказывается, что более эффективно принимать указанные препараты 10 или 14 дней. Чтобы была достигнута максимальная эрадикация Хеликобактер пилори и исключена вероятность рецидивов, тройную терапию при отсутствии противопоказаний и других ограничений нужно назначать в полном объеме и по дозировкам, и по срокам лечения.

Трехкомпонентную схему можно применять как первую линию терапии в странах, где частота устойчивых к действию кларитромицина штаммов H. pylori составляет менее 15–20%. Развитие устойчивости возбудителя к Кларитромицину объясняется частым назначением антибиотиков из группы макролидов при бактериальных осложнениях ОРВИ и респираторных заболеваниях у детей и взрослых. Если резистентность к Кларитромицину обнаруживается в среднем у 10% населения, то для Метронидазола этот показатель гораздо выше и составляет от 20 до 40%, что значительно ограничивает возможность применения этого антибактериального средства.

Как альтернатива трехкомпонентной эрадикационной терапии может использоваться четырехкомпонентная схема, дополнительно включающая висмута трикалия дицитрат (препарат Де-Нол) по 120 мг 4 раза в день. Если у больного с диагностированной хеликобактерной инфекцией имеется атрофия слизистой желудка, сопровождающаяся отсутствием продукции соляной кислоты, то назначать ИПП в данном случае не надо, поэтому их исключают, оставляя висмута трикалия дицитрат.

Для пациентов пожилого возраста, у которых ввиду высокого риска осложнений при назначении сразу двух антибиотиков, проведение полноценной антихеликобактерной терапии первой линии невозможно, рекомендуется следующая сокращенная схема лечения на 14 дней:

  • Амоксициллин;
  • любой ИПП;
  • препарат соли висмута.

При наличии показаний у пожилых пациентов антибиотик может быть вообще отменен. При этом прием препаратов висмута назначают на 28 дней, при болевых ощущениях дополнительно выписывают короткий курс ИПП.

Назначение

Тест «РЭД Helicobacter pylori» предназначен для in vitro одноэтапного быстрого качественного выявления Helicobacter pylori в кале.

Краткая информация

Helicobacter pylori – это спиралевидная бактерия, которая встречается в слизистой оболочке желудка или прикрепляется к эпителию желудка. Helicobacter pylori является причиной язвы двенадцатиперстной кишки (более 90% всех случаев) и язвы желудка (более 80% всех случаев).

Принцип метода

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце клеток Helicobacter pylori они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против Helicobacter pylori, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале клеток Helicobacter pylori.

В том случае, если в анализируемом образце присутствуют клетки Helicobacter pylori, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце клеток Helicobacter pylori на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.

Состав

Один комплект теста «РЭД Helicobacter pylori» включает:

  • тест-полоски иммунохроматографические «РЭД Helicobacter pylori» в кассетах из пластика белого цвета – 5, 10 или 20 шт.;
  • пробирки с крышкой-капельницей и стержнем для забора образца кала, содержащие буфер для растворения образца – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
  • этикетки на клеевой основе для маркировки пробирок пользователем – 5, 10 или 20 шт., соответственно;
  • инструкцию по применению теста «РЭД Helicobacter pylori» – 1 шт.

Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.

Комплект тестов «РЭД Helicobacter pylori» упакован в картонную коробку.

Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора

  • контейнеры для сбора образцов кала;
  • одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
  • часы или таймер.

Аналитические характеристики

  • Чувствительность теста «РЭД Helicobacter pylori» составляет >94%.
  • Специфичность теста «РЭД Helicobacter pylori» составляет >99%.
  • Время проведения анализа – 10 мин.

Каждый тест «РЭД Helicobacter pylori» предназначен для одного определения наличия клеток Helicobacter pylori в кале человека.

Меры предосторожности

Тест «РЭД Helicobacter pylori» предназначен только для in vitro диагностики.

Все компоненты теста «РЭД Helicobacter pylori» в используемых концентрациях являются нетоксичными.

Не следует использовать тесты «РЭД Helicobacter pylori» после истечения срока годности.

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Анализируемые образцы

Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.

Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер.

Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.

Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.

Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.

Подготовка образцов

1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 5 разных зон образца, собрав примерно 250 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 250 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу(рис. 1-2).

2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).

Проведение анализа

Анализируемые образцы кала и тесты «РЭД Helicobacter pylori» перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры (15–25°С).

3. Встряхнуть пробирку с раствором образца.

4. Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы (рис. 2-1). Непосредственно перед началом анализа вскрыть упаковку теста «РЭД Helicobacter pylori», разрывая ее вдоль прорези. Извлечь кассету с тест-полоской и положить ее на ровную горизонтальную поверхность.

5. 4 капли (примерно 100 мкл) жидкого образца внести в круглое окошко кассеты, обозначенное буквой S, избегая попадания твердых частиц образца вместе с жидкостью (рис. 2-2). Для каждого образца или контроля необходимо использовать отдельную пробирку с буфером для растворения образца и отдельный тест «РЭД Helicobacter pylori».

6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала клеток Helicobacter pylori (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала клеток Helicobacter pylori (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Helicobacter pylori в образце.

В тех случаях, когда в тестовом окошке кассеты не образуется ни одной окрашенной линии или образуется только красная аналитическая линия (Т), результат анализа признается недействительным (рис. 3-3). При этом анализ следует повторить с использованием другого теста «РЭД Helicobacter pylori».

Избыточное количество образца кала может привести к появлению в тестовом окошке кассеты нечетких линий темного цвета, которые не имеют диагностического значения. В этом случае следует добавить в образец кала бoльшее количество растворителя и повторить анализ с использование другого теста «РЭД Helicobacter pylori».

Результаты, полученные с использованием теста «РЭД Helicobacter pylori», являются предварительными. Для их подтверждения необходимо проведение дополнительных исследований образцов кала с использованием альтернативных методов.

Условия хранения и эксплуатации

Тесты «РЭД Helicobacter pylori» должны храниться при температуре от 2 до 25°С в упаковке предприятия-изготовителя в сухом месте в течение всего срока годности. Замораживание тестов «РЭД Helicobacter pylori» не допускается.

Срок годности тестов «РЭД Helicobacter pylori» – 24 мес. с даты изготовления.

После вскрытия упаковки тесты «РЭД Helicobacter pylori» должны быть использованы в течение 2 ч при хранении в сухом месте при комнатной температуре.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению теста «РЭД Helicobacter pylori».

Для выбора варианта лечения необходима своевременная и достоверная диагностика Н.Рylori.

Все способы диагностики Н.Pylori, используемые в настоящее время, условно можно разделить на прямые и не прямые (косвенные). На инвазивные и неинвазивные [5, 7]. Инвазивные методы требуют проведения биопсии слизистой оболочки желудка при эндоскопическом обследовании, неинвазивное – не требуюет биопсии. Прямые методы позволяют непосредственно выявить H.Pylori. Косвенные методы регистрируют не саму бактерию, а последствия ее персистирования в организме.

Большинство прямых методов, основаны на инвазивных способах забора материала. Прямая диагностика инфекции H.Pylori, является достаточно трудоемким и отсроченным во времени процессом [13].

После принятия Маастрихтского консенсуса [14] несколько лет в странах Европы существовала концепция “тестирования и эндоскопии” (“testing and endoscopy”) [15]. Последняя заключалась в том, что при первичном обращении пациента тестировали на наличие инфекции H. Pylori, и при положительных результатах, обязательно проводили эндоскопическое исследование. Однако, опыт повседневной практики показал неоправданное увеличение количества гастроскопий, которое не компенсировалось положительными эффектами в виде улучшения симптоматики или же повышения качества жизни пациентов. Необходимость в проведении гастроскопии при желудочной диспепсии диктуется онконастороженностью врачей. Вместе с тем, известно, что для пациентов молодого возраста при отсутствии тревожных симптомов в виде потери массы тела или анемии в превалирующем большинстве случаев злокачественные новообразования желудка не характерны. Поэтому для первичных пациентов с язвенной болезнью начали использовать как обязательную концепцию “тестировать и лечить” (“test and treat”), принятую на Маастрихтском консенсусе II в 2000 году [10, 16-19]. Руководящие органы здравоохранения многих стран рекомендуют такой же подход для ведения первичных пациентов молодого возраста. Возрастные границы в рекомендациях варьируют в зависимости от уровня заболеваемости раком желудка в конкретной популяции (таблица 1). Возрастной порог составляет 45 – 55 лет [20-26].

Таблица 1. Пороговый возраст при использовании концепции “test and treat”

Организация Пороговый возраст, годы
Британское гастроэнтерологическое общество < 55
Европейское общество первичной помощи в гастроэнтерологии < 45
Европейская группа по исследованию H.Рylori < 45
Американская гастроэнтерологическая ассоциация < 45
Руководство Шотландской межуниверситетской сети < 55

В соответствии с выработанной концепцией Маастрихтского консенсуса II, Европейской и Российской группами были приняты диагностические алгоритмы, определяющие проведение первичной диагностики инфекций H.Pylori неинвазивными методами: серологическим, дыхательным, ПЦР в кале и слюне.

В России для быстрой диагностики H.Рylori зарегистрированы серологические тесты на основе латекс-агглютинации и сэндвич-метода: FastRead H.Рylori® (CQI-biomed) и Pyloriset® Dry (Orion Diagnostica). Преимуществом этих методик является простота их выполнения и быстрота получаемого результата. К недостаткам следует отнести невысокую степень чувствительности и специфичности, а также невозможность количественного определения антител к Н.Рylori, что не позволяет их использовать для контроля за эрадикацией.

Среди неинвазивных методов диагностики Н.Рylori, за рубежом наиболее распространен серологический иммуноферментный анализ: в крови пациента определяют антитела IgG, IgM к Н.Рylori [27-32]. Данные тесты оптимальны для эпидемиологических исследований и скрининга. Такие исследования проводятся во всех западных странах. В качестве примера можно привести обследование, проведенное в Италии, с помощью ИФА-тестов 1010 доноров, у 298 из которых были определены антитела IgG к Н.Pylori [23]. При последующей гастроскопии у 70 (23,5%) человек из IgG серопозитивной группы выявлены пептические язвы, у 41 (13,8%) – эрозивный дуоденит, у 2 (0,7%) – рак желудка. К сожалению, в России не проводят аналогичные плановые исследования по выявлению инфицированности населения Н.Pylori, хотя скрининг, направленный на обнаружение антител к Н.Рylori, способствует выявлению лиц с гастродуодеальной патологией. Своевременная диагностика и последующая адекватная терапия помогают предотвратить рецидивы заболевания и исключить инфицированность Н.Рylori больших групп населения.

До последнего времени серологические тесты рассматривали только с позиций выявления Н.Рylori у пациентов до лечения. Действительно, существовали ограничения, затрудняющие проведение мониторинга эффективности эрадикации Н.Рylori с их помощью. Последнее связано с тем, что исходное значение концентрации специфических антител к Н.Рylori в сыворотке крови пациентов, установленное стандартными ИФА-тестами, варьирует в значительных пределах, а снижение ее после эрадикации бактерии имеет нелинейный характер. Современное поколение ИФА-тестов, благодаря усовершенствованию технологии сорбции антигена и модификации данного метода, позволяет количественно оценивать степень инвазии H.Pylori, а также степень эрадикации [33-37]. Различными авторами доказано, что снижение титра специфических антител к Н.Pylori на 40% от исходного позволяет констатировать эрадикацию более чем у 90% больных к 3 месяцу после окончания лечения. Серонегативность у всех вылеченных больных наступает через 12 месяцев [38].

В таблице 2 представлены литературные данные по чувствительности, специфичности, предсказательной ценности положительного результата (РРV) и предсказательной ценности отрицательного результата (NPV) наиболее используемых в мире серологических тестов [39].

Таблица 2. Характеристики серологических тестов для выявления НР

Наименование тест-системы Чувствительность,% Специфичность,% PPV NPV
Oxoid Unipath, Latex agglutination 93 83 87 91
Pyloriset dry Orion, Murex latex 77 100 100 80
GAP IgG ELISA Био-Рад, ИФА 100 84 90 100
ИммуноКомб Орженикс, ИФА 98,1 86 100 97
Pyloriset EIA-G Orion, Murex 93 90 91 92
Helisal OneStep, Cortecs Diagnostics 84,1 63,0 73,3 76,6

Как видно из представленных данных, чувствительность и специфичность ИФА тест-систем выше аналогичных показателей серологических тестов на основе латекс-агглютинации и сэндвич-метода.

При выборе методов диагностики Хеликобактериоза для данной медицинской технологии были учтены следующие факторы:

  • чувствительность, специфичность и достоверность тестов;
  • возможность количественного определения антител к H.Pylori;
  • неравномерное оснащение различных институтов, клиник, стационаров и поликлиник современной диагностической аппаратурой и реактивами;
  • необходимость в укреплении диагностической службы первичной медицинской помощи современными высокотехнологичными, доступными методами диагностики.

Из зарегистрированных в Российской Федерации, вышеперечисленным требованиям отвечают иммуноферментные Быстрые Простые Тесты ИммуноКомб H.PILORI IGG (Орженикс), как наиболее чувствительные, специфичные, позволяющие количественно определить титр антител IgG в сыворотке, плазме или цельной крови. БПТ ИммуноКомб не требуют специальной квалификации персонала и дополнительного оборудования. Методика ИммуноКомб основана на оригинальной модификации твёрдофазного иммуноферментного анализа: зубцы пластикового гребня сенсибилизированы соответствующими антигенами или антителами, ячейки ванночек заполнены готовыми растворами конъюгата, промывочными буферами и красителем. При проведении анализа зубцы гребня приводят в контакт с исследуемыми образцами в первом ряду ванночки, а далее последовательно переносят из ячейки в ячейку. В случае положительного результата на зубце гребня появляются точки (окрашенные комплексы антиген-антитело). Правильность постановки анализа подтверждается появлением на зубце контрольного пятна. Учёт результатов – визуальный (для количественной оценки результатов сравнивают интенсивность окраски точек в опыте со стандартной цветовой шкалой, входящей в состав набора) или автоматический с помощью прибора КомбСкан Набор позволяет провести от 1 до 36 анализов, время анализа – 66 минут, срок годности наборов 9 месяцев.

Тест-системы Иммунокомб сертифицированы СЕ 0459 и широко используются более чем в ста странах мира. Тесты ИммуноКомб удовлетворяют всем стандартам качества, установленным директивой 98/79/EC Европейского парламента и Совета для in-vitro диагностики.

Производство тест-систем ИммуноКомб имеет GMP Certificate и соответствует нормам ВОЗ. Качество тестов подтверждено международными стандартами SI ISO 9001:1994, и ISO 13485:1996 и Европейскими стандартами EN 928:2001, EN 928:1996, EN 980:1997, EN 13612:2002, EN 13640:2002, EN 13641:2002, EN 46001:1996

Как достоверные, высокочувствительные и специфичные тесты ИммуноКомб отобраны для программ ВОЗ, Юнеско, Красного Креста. Проверены и одобрены институтом П.Эрлиха (Германия), институтом А.Фурниэ (Франция), AFSSAPS, ГИСКом им. Тарасевича.

В настоящее время БПТ ИммуноКомб комплектуются в России совместным предприятием ЗАО «Биоград» (Санкт-Петербург) из реагентов, производимых фирмой Орженикс.

В 1997 г., в ГИСК им. Л.А.Тарасевича, при проведении Государственных испытаний с целью регистрации Иммуноферментного БПТ ИммуноКомб H.PILORI IGG фирмы Орженикс, был проведен сравнительный анализ предлагаемой методики с референс-ИФА тест-системой фирмы Био-Рад «Иммуноферментный набор для количественного определения антител к Helicobacter Pylori IgG» (Регистрационное удостоверение МЗМПР № 97/316). Сравнение проводилось на 30 человеческих сыворотках от взрослых и детей с патологией пищеварительного тракта и здоровых, либо больных с поражением других органов. Для анализа полученных данных была составлена таблица сопряженности двух признаков: первый признак – выявление IgG антител к H.Pylori в сыворотках по методике Орженикс и второй признак – выявление указанных антител по методике Био-Рад. Четыре сыворотки были отброшены, т.к. не могли быть оценены при помощи референс-метода. Данные представлены в таблице 3 [40].

Таблица 3. Сопряженность выявления антител к H.Pylori двумя методиками

Био-Рад Положительные Отрицательные Сумма
Орженикс      
Положительные 19 2 21
Отрицательные 5 5
Сумма 19 7 26

l1 = 21, m1 = 19, n = 26

l2 = 5, m2 = 7

Статистическая обработка данных показала относительно большое значение  = 16,8, свидетельствующее о том, что признаки сильно сопряжены друг с другом. Отметим также, что коэффициент корреляции в данном случае оказывается равным 0,8 и это также свидетельствует о наличии сильной связи двух рассматриваемых признаков.

Таким образом, по данным проведенного эксперимента можно сделать вывод, что сравниваемые методики приблизительно эквивалентны.

Клинические испытания проводились в клинике гастроэнтерологии детской клинической больницы № 7 г. Москвы.

Всего было исследовано 95 сывороток.

В детской больнице была исследована 41 сыворотка от детей с различной гастропатологией и 18 – от здоровых и детей с другими диагнозами, не связанными с нарушениями функций желудочно-кишечного тракта. Параллельно с серологическим методом, основанным на применении диагностического набора ИммуноКомб ИммуноКомб H.PILORI IGG, диагноз у пациентов устанавливали совокупностью методов клинической диагностики: эндоскопическим исследованием, рентгеноскопией и т.д. При сопоставлении данных клинической диагностики и серологического исследования были получены следующие цифры: у детей, страдающих различными формами гастрита, гастродуоденита, язвенной болезнью и полипозом, повышенный уровень IgG антител к H.pylori выявлялся в 24 случаях, что составляло 58,5%. При обследовании взрослых пациентов (всего в группе 36 больных) совпадение положительных результатов серологического анализа и клинического диагноза обнаружено в 97,2% случаев; у пяти больных данные серологического исследования были подтверждены гистологическим методом (в препаратах биоптатов антрального отдела и тела желудка, окрашенных по Гимза), цитологическим методом (в мазках-отпечатках биоптатов, окрашенных по Гимза) и уреазным методом с применением Де-нол теста. Положительный результат серологического теста у такого контингента больных является закономерным.

Параллельное определение чувствительности и специфичности препаратов фирм Орженикс и Био-Рад на 30 сыворотках обнаружило сходные результаты:

  • чувствительность тест-системы ИммуноКомб фирмы Орженикс – 85 %,
  • чувствительность тест-системы фирмы Био-Рад – 80%.

Если за точку отсчета брать данные, полученные при помощи референс-препарата Био-Рад, то чувствительность теста ИммуноКомб H.PILORI IGG составляет 100%, а специфичность – 71% (см.Таблицу 3) [40].

При сопоставимых характеристиках сравниваемых тестов в заключении ГИСКа им. Тарасевича [40] было отмечено, что тесты ИммуноКомб не требуют дополнительного оборудования, позволяют получать результат анализа через 66 минут и документировать его, делают доступным, наряду с групповым, индивидуальное тестирование. Наличие внутреннего контроля в тестах ИммуноКомб обеспечивает безошибочную постановку анализа и максимальную достоверность результата.

ИммуноКомб – оригинальная модификация Иммуноферментного анализа – единственные Иммуноферментные Быстрые Простые Тесты. В отличие от других БПТ и экспресс-тестов, чувствительность и специфичность ИммуноКомб достигает, а в некоторых случаях превосходит характеристики классических ИФА ELISA-тестов, требующих дорогостоящего оборудования, специальных помещений и подготовки персонала. Оснащение диагностической службы первичного медицинского звена БПТ ИммуноКомб H.PILORI IGG позволит своевременно и достоверно поставить диагноз и назначить адекватную медикаментозную терапию.

132

Оцените статью
Рейтинг автора
4,8
Материал подготовил
Михаил Галушко
Гастроэнтеролог, кандидат медицинских наук, стаж - более 27 лет.
А как считаете Вы?
Напишите в комментариях, что вы думаете – согласны
ли со статьей или есть что добавить?
Добавить комментарий